Nach ihrer Trennung vom Joker beschließt Harley Quinn, sich zu emanzipieren und auf eigenen Füßen zu stehen. Doch nun, da sie nicht mehr unter dem Schutz des berüchtigten Clownprinzen des Verbrechens steht, muss Harley feststellen, dass es in Gotham City viele Leute gibt, die ihr nach dem Leben trachten, und dass sie sich nun ohne Gefahr von Vergeltungsmaßnahmen an ihr vergreifen können.
Als Roman Harley töten will, bietet diese an, ihm einen Gefallen zu tun und für ihn die junge Cassandra Cain zu finden, ein Waisenkind, das einen Diamanten gestohlen hat, der das Vermögen der erschossenen Mafiafamilie Bertinelli enthielt. Doch als Harley Cassandra wiederfindet, findet sie Gefallen an dem Mädchen und nimmt sie unter ihre Fittiche.
Die Stadtdetektivin Renee Montoya setzt ihrerseits alles daran, Roman zu verhaften. Sie versucht, Dinah Lance, eine Sängerin aus Romans Nachtclub, die kürzlich zum Chauffeur befördert wurde, als Maulwurf anzuwerben. Doch Dinah, die meta-menschliche Fähigkeiten verbirgt, möchte keine Heldin werden, da dieser Weg den Tod ihrer Mutter verursacht hat, als sie noch ein Kind war.
Gleichzeitig streift ein mysteriöser, mit einer Armbrust bewaffneter Killer durch Gotham City, um Mafiosi zu ermorden, und könnte etwas mit diesem dunklen Fall zu tun haben.
Der Film kam am 7. Februar 2020 in die deutschen Kinos. Infolge schlechter Einspielergebnisse wurde der Film am 10. Februar 2020 in Harley Quinn: Birds of Prey umbetitelt
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